Emergence of multidrug-resistant bacteria isolated from surgical site infection in dogs and cats / [Emergência de bactérias multirresistentes isoladas da infecção no sítio cirúrgico em cães e gatos]

Surgical site infections (SSIs) and antimicrobial resistance among pathogens causing SSI are a growing concern in veterinary hospitals. One major reason, the widespread use of antimicrobials, has led to increased incidence of SSIs. This study identified bacteria and resistance profiles to antimicrobials in the SSI cases diagnosed at the Surgical Clinic of Small Animals in the Veterinary Hospital, Federal University of Viçosa, Brazil. The main genus identified was Staphylococcus, followed by Escherichia, Enterococcus, Bacillus, Shigella, Citrobacter, Proteus, Morganella, Serratia, Enterobacter, Pseudomonas and Klebsiella were also found, but in small number. The results indicated the predominance of Gram-negative bacteria among the collected samples. Most of isolates identified were resistant to more than one of the following antimicrobials: ampicillin, tetracycline, enrofloxacin, amoxicillin/clavulanic acid and cephalotin. Of the 17 Staphylococcus sp. isolates, two (11.8%) were methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and 11 (64.7%) of them were methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius (MRSP). There were bacterial genera identified with resistance to all tested antimicrobials in different proportions. This should alert veterinary hospitals to the emergence of multidrug-resistant bacteria and to the requirement for the revision of surgical protocols with regard to antimicrobial prophylaxis and therapy.(AU)

As infecções em sítio cirúrgico (ISCs) e a resistência bacteriana entre os patógenos relacionados constituem uma preocupação crescente nos hospitais veterinários. O aumento na incidência de ISCs possui forte relação com o uso amplo e disseminado de antibióticos. O presente estudo identificou bactérias e perfis de resistência a antibióticos nos casos de ISCs diagnosticados na Clínica Cirúrgica de Pequenos Animais do Hospital Veterinário da Universidade Federal de Viçosa, Brasil. O principal gênero identificado foi Staphylococcus, seguido pelos gêneros Escherichia, Enterococcus, Bacillus, Shigella, Citrobacter, Proteus, Morganella, Serratia, Enterobacter, Pseudomonas e Klebsiella, porém, em menor quantidade. Os resultados demonstraram a predominância de bactérias Gram-negativas entre as amostras coletadas. A maioria dos isolados identificados eram resistentes a um ou a mais de um dos seguintes antibióticos: ampicilina, tetraciclina, enrofloxacina, amoxicilina/ácido clavulânico e cefalotina. Entre os 17 isolados de Staphylococcus sp., dois (11,8%) eram Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (SARM) e 11 (64,7%) eram Staphylococcus pseudintermedius resistentes à meticilina (SPRM). Houve identificação de gêneros bacterianos com diferentes proporções de resistência para todos os antibióticos avaliados. Esses achados devem alertar os hospitais veterinários para a emergência de bactérias multirresistentes e para a necessidade de revisar a profilaxia e a terapia antimicrobiana referente aos protocolos cirúrgicos.(AU)

Isolation and genetic stability of an infectious bronchitis virus strain (IBV) / Isolamento e estabilidade genética de uma cepa do vírus da bronquite infecciosa (IBV)

O vírus da bronquite infecciosa (IBV) é um importante patógeno respiratório presente na avicultura comercial e tem provocado grandes perdas econômicas em todo o mundo. A vacinação é realizada pela indústria produtora de aves, mas continuam surgindo novos sorotipos e variações antigênicas, dificultando o controle de IBV. Nós realizamos uma caracterização molecular de uma cepa de IBV obtida diretamente de tecidos e comparamos com a mesma cepa que havia sido passada três vezes em ovo embrionado. Nós mostramos uma variação significante na sequência viral depois de ter sido isolada em ovo embrionado.(AU)

Description of Methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius from canine pyoderma in Minas Gerais state, Brazil / Descrição de Staphylococcus pseudintermedius meticilina-resistentes de piodermite canina no estado de Minas Gerais, Brasil

Methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius (MRSP) is of worldwide concern in veterinary medicine. The identification of resistant strains is necessary for proper treatment and the prevention of its propagation among animals. This study aimed to identify S. pseudintermedius isolated from canine pyoderma and evaluate their resistance profiles. Lesions from 25 dogs with pyoderma were sampled. Bacterial isolates were subjected to phenotypic and genotypic analysis for identification of the causative agent. S. pseudintermedius isolates were subjected to SmaI macrorestriction analysis and PFGE for genetic grouping, and PCR to identify the presence of the mecA gene. Their resistance profiles against 12 antimicrobials were also assessed. According to the microbiological analysis, 70 of the 75 isolates obtained were S. pseudintermedius. The isolates presented PFGE patterns, with similarity varying between 84.6 and 100%, and were grouped into 19 clusters. Despite a high frequency of mecA-positive isolates (66 out 70), only 12 presented resistances to oxacillin. Multi-resistance was identified in 29 isolates. The high frequency of MRSP isolated in this study highlights the relevance of identifying resistant strains to lead proper clinical treatment.

Staphylococcus pseudintermedius meticilina-resistente (MRSP) é de preocupação mundial na medicina veterinária. A identificação de cepas resistentes é necessária a um tratamento adequado e à prevenção da sua propagação entre os animais. O objetivo do estudo foi identificar S. pseudintermedius isolados de piodermite canina e avaliar o perfil de resistência. Foram coletadas amostras de lesões de 25 cães com piodermite. Os isolados bacterianos foram submetidos a análises fenotípicas e genotípicas para identificação do agente causador. Isolados de S. pseudintermedius foram submetidos à análise de macrorrestrição por SmaI e PFGE para agrupamento genético e à PCR para identificar a presença do gene mecA. Seu perfil de resistência contra 12 antimicrobianos também foi avaliado. De acordo com a análise microbiológica, 70 dos 75 isolados obtidos foram identificados como S. pseudintermedius. Os isolados apresentaram padrões de PFGE com similaridade variando entre 84.6 e 100% e foram agrupados em 19 grupos genéticos. Apesar da frequência alta de isolados mecA positivos (66 em 70), apenas 12 apresentaram resistência à oxacilina. Multirresistência foi identificada em 29 isolados. A alta frequência de MRSP isolados neste estudo destaca a relevância de se identificarem cepas resistentes para se conduzir um tratamento clínico adequado.

Association of number of tandem repeats in two important adhesins in Mycoplasma hyopneumoniae / Associação entre os números de repetições em tandem em duas importantes adesinas de Mycoplasma hyopneumoniae

Diversidade genética de Mycoplasma hyopneumoniae tem sido relatada em análise múltipla de repetições em tandem em número variável (MLVA). O objetivo deste estudo foi descrever a distribuição espacial e a heterogeneidade genética de tipos de M. hyopneumoniae no Brasil, bem como investigar a correlação entre regiões de repetição 1 (RR1) e 3 (RR3) de duas adesinas importantes (P97 e P146). Foram identificados 39 tipos de MLVA baseados no número de repetições em tandem em P97 RR1 e RR3 P146. A correlação negativa significativa (Spearman's rho = -0,26; P = 0,022) entre P97 RR1 e RR3 P146 foi observada, o que sugere um possível mecanismo compensatório que permitiria a bactéria manter a sua capacidade de adesão. Os resultados contribuem para compreender a epidemiologia das M. hyopneumoniae no quarto maior país produtor de suínos do mundo.(AU)

Sistemas de efluxo multidrogas em Escherichia coli e uso de inibidores como possíveis adjuvantes na terapia da mastite bovina / Multidrug efflux systems in Escherichia coli and the use of inhibitors as possible adjuvant therapy in bovine mastitis

Vinte e sete isolados de Escherichia coli provenientes de leite de bovinos com mastite clínica foram submetidos a teste de sensibilidade aos principais antimicrobianos usados no tratamento desta doença. Avaliou-se também a efetividade in vitro de dois inibidores de sistemas de efluxo multidrogas, fenilalanina arginyl ß naftilamida (PAβN) e 1-(1-Naphthylmethyl)-piperazine (NMP), utilizando-se a concentração inibitória mínima (CIM) como referência. A CIM e o sistema de efluxo foram detectados com base nas curvas de crescimento, utilizando-se a densidade óptica (D.O550), em diferentes concentrações da droga e na presença e ausência dos inibidores. Apenas quatro isolados apresentaram resistência à ampicilina e ao sulfametoxazol∕trimetoprim, simultaneamente, enquanto todos os 27 foram sensíveis aos demais antimicrobianos. Observaram-se valores para ampicilina variando de 6µg/mL a 250µg/mL e para sulfametoxazol∕trimetoprim de 12µg/mL a 1500µg/mL. Houve redução das CIMs desses antimicrobianos em todos os isolados na presença dos inibidores, exceto para sulfametoxazol∕trimetoprim na presença de NMP. Conclui-se que esses isolados possuem um estreito perfil de resistência e que PAßN apresentou melhor efeito inibitório em relação à ampicilina e ao sulfametoxazol∕trimetoprim, apresentando-se como um candidato a adjuvante no tratamento da mastite...

Twenty-seven isolates of Escherichia coli from cattle with clinical mastitis were subjected to sensitivity tests regarding main antimicrobials used in the treatment of this disease. We also evaluated in vitro effectiveness of two inhibitors of multidrug efflux systems, fenilalanina arginyl ß naftilamida (PAβN) and 1-(1-Naphthylmethyl)-piperazine (NMP), using the minimum inhibitory concentration (MIC) as a reference. MIC and multidrug efflux systems were detected in the growth curves, using optical density (D.O550) at different drug concentrations and the presence and absence of inhibitors. Only four isolates of E. coli were resistant to ampicillin and trimethoprim/sulfamethoxazole, simultaneously. However, all isolates were sensitive to the other antimicrobials. Were observed values ranging from 6mg to 250mg ampicillin/mL, and 12mg to 1500mg/mL trimethoprim/sulfamethoxazole. There was a reduction of the MIC of antimicrobials for all isolates in the presence of inhibitors, except for trimethoprim/sulfamethoxazole in the presence of NMP. In conclusion, these isolates have a narrow resistance profile and PAßN showed better inhibitory effect against ampicillin and trimethoprim/sulfamethoxazole, and is a candidate for the adjuvant treatment of mastitis...

Perfil de sensibilidade de células sésseis e planctônicas de Escherichia coli a antimicrobianos usados no tratamento da mastite bovina / Sensitivity profile of planktonic and sessile cells of Escherichia coli to antimicrobial used in the treatment of bovine mastitis

Escherichia coli é um micro-organismo altamente adaptativo e sua habilidade em formar biofilmes pode ser fundamental na resistência a tratamentos com antimicrobianos. A avaliação da concentração mínima inibitória (CMI) vem sendo utilizada para verificar a sensibilidade dos micro-organismos aos antimicrobianos. Entretanto, quando se avaliam células sésseis, a concentração do antimicrobiano requerido para erradicação do biofilme é maior do que a determinada pela CMI. Objetivou-se comparar as CMI com as concentrações mínimas de erradicação de biofilmes (CMEB) de antimicrobianos usados no tratamento da mastite em 27 isolados de E. coli produtores de biofilmes provenientes de mastite. Os isolados foram submetidos a testes de sensibilidade a antimicrobianos usados no tratamento da mastite, tanto para células planctônicas, por meio da CMI, quanto para células sésseis, pela avaliação da CMEB. Os resultados revelaram uma alta sensibilidade: apenas quatro (14,8%) isolados obtiveram valores da CMI elevados, variando de 4 a 10µg/mL, sendo classificados como resistentes. Para os demais isolados (85,2%), os valores foram menores, variando de 0,125 a 2µg/mL, classificados como sensíveis. A avaliação de CMEB indicou que a concentração dos antimicrobianos necessária para eliminar as células sésseis variou de 100µg/mL a 500µg/mL. Os valores de CMEB foram significativamente maiores nos isolados grandes e moderados produtores de biofilmes em relação aos isolados fracos produtores de biofilmes (p<0,001). Não houve correlação entre os valores de CMEB e CMI (p>0,05). A escolha da terapêutica antimicrobiana correta para o tratamento de infecções intramamárias em bovinos relacionadas com a produção de biofilmes parece exigir a aplicação de testes mais específicos. Testes de susceptibilidade antimicrobiana baseados apenas em valores de CMI mostraram-se ineficazes em determinar com precisão a susceptibilidade das células bacterianas sésseis.

Escherichia coli is a highly adaptive microorganism. Its ability to form biofilms may be critical for resistance to antimicrobial treatments. Evaluation of minimum inhibitory concentration (MIC) has been used to check the sensitivity of microorganisms to antibiotics, however, when evaluating sessile cells, the required antibiotic concentration to eradicate biofilm is greater than determined by MIC. This study aimed to compare MIC with minimum biofilm eradication concentration (MBEC) of antimicrobials used in mastitis treatment in 27 E. coli biofilm producers isolates from mastitis. Isolates were tested for sensitivity to antimicrobials used in mastitis treatment, for both planktonic cells (by CMI) and sessile cells (by MBEC). The results revealed high sensitivity: only four (14.8%) isolates showed high MIC values, ranging from 4 to 10g/mL and they were classified as resistant. All other isolates (85.2%) showed lower values, ranging from 0.125 to 2mg/mL, and they were classified as sensitive. Evaluation of MBEC indicated that concentration of antimicrobial needed to remove sessile cells ranged from 100mg/mL to 500mg/mL. MBEC values were significantly higher in large and moderate biofilm producers isolates regarding weak biofilm producers isolates (p<0.001). There was no correlation between MBEC and CMI values (p>0.05). The correct choice of antimicrobial therapy for treatment of mammary infections in cattle related to biofilm production seems to require application of more specific tests. Antimicrobial susceptibility testing based only on MIC values proved ineffectiveness to accurately determination the susceptibility of sessile bacterial cells.

Antimicrobial profile screening of two oils of Copaifera genus / Avaliação do perfil antimicrobiano de dois óleos do gênero Copaifera

O objetivo deste estudo foi identificar a atividade inibitória de óleos de copaíba sobre o crescimento dos micro-organismos: Shigella flexneri, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Citrobacter freundi, Staphylococcus aureus, Actinobacillus pleuropneumoniae e Haemophilus parasuis. Foi realizado um teste de difusão em ágar com duas soluções a 10 por cento de óleos de copaíba obtidos de duas diferentes espécies de copaíba (Copaifera officinalis e C. langsdorffii) e um controle negativo com tween 80 e água. Os isolados clínicos de H. parasuis e A. pleuropneumoniae foram incubados em microaerofilia. Os resultados mostraram três espécies Gram-negativas inibidas por ambas as soluções de óleo de copaíba: E. coli, P. aeruginosa e S. flexneri. Na inibição de P. aeruginosa o óleo de C. officinalis foi superior ao de C. langsdorffii (P<0,05). Todas as cepas de S. aureus tiveram seu crescimento inibido pelas soluções no ensaio, sem diferença estatística entre os halos. Estes resultados sugerem que o óleo de copaíba pode ser uma fonte potencial de compostos inibitórios para ser utilizada como antimicrobianos no tratamento de infecções humanas e animais e conservação de alimentos.

Levantamento sorológico de Mycobacterium avium subesp. paratuberculosis em bovinos leiteiros no estado do Espírito Santo / Serological survey of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in dairy cattle in Espírito Santo state

The occurrence of antibodies to Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP) was verified in dairy cattle from Espírito Santo state. A total of 1,450 serum samples were analyzed for antibodies anti-MAP, using ELISA. Dairy cattle, males and females, from four regions of Espírito Santo state were used. One hundred sixty-five (11.4 percent) samples were positive for anti-MAP, 33 (2.3 percent) were considered suspicious, and 1,252 (86.3 percent) were negative. In all regions, seropositive animals were found, indicating that the agent is spread by the State, posing a threat to the local dairy farming and neighboring states, as well as public health, since MAP can be involved with Crohn's disease in humans. This result presents the first serologic anti-MAP survey in dairy cattle of Espírito Santo State.

Pontos críticos de controle de Salmonella spp. no abate de frangos / Critical control points for Salmonella spp. in poultry slaughter

Avaliou-se a presença de Salmonella spp. em esfregaços superficiais em 135 carcaças de frangos, coletadas em cinco diferentes fases do abate, utilizando os métodos de microbiologia convencional, reação em cadeia de polimerase (PCR) e imunoanálise. Os três métodos resultaram em tendência semelhante de detecção de Salmonella spp. nas carcaças de frango, ao longo da linha de abate. A maior frequência de Salmonella spp. foi determinada após o chuveiro de lavagem das carcaças, localizado entre a evisceração e o pré-resfriamento. Vinte (14,8 por cento) esfregaços foram determinados pela metodologia convencional, 52 (38,5 por cento) pela PCR e 66 (48,8 por cento) pela imunoanálise. A menor contaminação foi encontrada na saída do pré-resfriamento, com frequências de 3,7 por cento, 0 por cento e 16,7 por cento, respectivamente. Salmonella spp. foi encontrada em todas as fases de abate, mostrando a importância do monitoramento de diferentes pontos críticos de controle eventualmente identificados no abate de frangos.

The presence of Salmonella spp. in superficial swabs collected from 135 chicken carcasses in five different slaugther steps using the conventional microbiology, PCR, and immunoanalysis methods was evaluated. The three methods presented similar tendency to detect Salmonella spp. in the chicken carcasses along the slaugther line. The highest frequency of Salmonella spp. was found after the shower, located between the evisceration and the chiller. Twenty (14.8 percent) swabes were determined by the conventional methodology, 52 (38.9 percent) by the PCR, and 66 (48.9 percent) by the immunoanalysis. The lowest contamination was found after chiller tank, where the frequencies were 5 (3.7 percent), 0 (0 percent), and 24 (16.7 percent), respectively. Salmonella spp. was found in all the slaugther steps. This shows the importance for monitoring different CCP (Control Critical Point) in the poultry slaughterhouses.

Detection of Mycoplasma hyopneumoniae in lungs and nasal swabs of pigs by nested PCR / Detecção de Mycoplasma hyopneumoniae em pulmões e suabes nasais de suínos por nested PCR

Fifty-four samples were collected from growing and finishing pigs for the molecular diagnosis of enzootic porcine pneumonia. Nineteen lung fragments were obtained from pigs that showed signs of respiratory disease and 35 nasal swabs were obtained from clinically healthy pigs. For the detection of the bacterial genome in the samples, the nested PCR technique was used to amplify a fragment of 706bp. This fragment was subsequently cloned and sequenced. The sequence of obtained nucleotides was compared with six other sequences of Mycoplasma hyopneumoniae and 11 sequences of other bacteria available in the Genbank. To measure the sensitivity of the nested PCR, serial dilutions (10-1 to 10-15) of cloned fragments were conducted based on the concentration of 300ng. Ten lung fragments and eight nasal swabs showed positive for M. hyopneumoniae and the limit of detection was estimated to be 0.3fg DNA cloned. The sequence of nucleotides obtained showed 99.1 percent homology with the other sequences of M. hyopneumoniae, demonstrating that the nested PCR used in this study may provide an important diagnostic tool for the detection of this agent.

Foram coletadas 54 amostras de animais em fase de crescimento e terminação para o diagnóstico molecular da pneumonia enzoótica suína. Dezenove fragmentos de pulmão foram obtidos de suínos que apresentavam sinais de doença respiratória e 35 suabes nasais foram obtidas de suínos clinicamente saudáveis. Para a detecção do genoma bacteriano nas amostras, foi utilizada a técnica de nested PCR que originou um fragmento de 706pb, o qual foi, posteriormente, clonado e sequenciado. A sequência de nucleotídeos obtida foi comparada com outras seis sequências de Mycoplasma hyopneumoniae e 11 sequências de outras bactérias disponíveis no Genbank. Para medir a sensibilidade da nested PCR, foram realizadas diluições seriadas (10-1 a 10-15) do fragmento clonado, partindo da concentração de 300ng. Dez fragmentos de pulmões e oito suabes nasais apresentaram resultado positivo para M. hyopneumoniae e o limite de detecção foi estimado em 0,3fg de DNA clonado. A sequência de nucleotídeos obtida foi de 99.1 por cento de homologia com as outras sequências de M. hyopneumoniae, demonstrando que a nested PCR utilizada neste estudo pode ser uma importante ferramenta de diagnóstico para a detecção desse agente.

Resistência a antimicrobianos dependente do sistema de efluxo multidrogas em Escherichia coli isoladas de leite mastítico / Antimicrobial resistance dependent on multidrugs efflux in Escherichia coli isolated from the mastitic milk

Identificaram-se e caracterizaram-se a resistência e a multirresistência aos principais antimicrobianos usados no tratamento de mastite bovina causada por Escherichia coli. A concentração inibitória mínima (MIC) e o sistema de efluxo foram detectados pelas curvas de crescimento, com base na densidade óptica, em diferentes concentrações da droga e na presença e na ausência do desacoplador da força próton-motora (PMF). E. coli 1 foi resistente à neomicina e à gentamicina; E. coli 3 e 4, à tetraciclina e à estreptomicina; e E. coli 2 e 6 à gentamicina. E. coli 5 apresentou modelo de sensibilidade. Observou-se que MICs de todos os antimicrobianos dos multirresistentes (E. coli 1, 3 e 4) diminuíram na presença do desacoplador, o que sugere sistema de efluxo multidrogas. Após cura, apenas E. coli 1 apresentou modelo de sensibilidade, porém não houve alterações das MICs, antes e após adição do desacoplador. Os resultados indicam possível presença de mecanismo de resistência dependente da PMF codificado, ou parte dele, em plasmídeo.

Resistance and multiresistance to main antimicrobials used for treating bovine mastitis caused by Escherichia coli were identified and characterized. The minimal inhibitory concentration (MIC) and efflux systems were detected by the use of growth curves based on optical density at different drug concentrations and both presence and absence of uncoupler of the proton-motive force (PMF). E. coli 1 was resistant to neomycin and gentamycin, E. coli 3 and 4 were resistant to tetracycline and streptomycin, whereas E. coli 2 and 6 were resistant to gentamycin. E. coli 5 showed sensibility model. MICs of all antimicrobials of the multiresistant samples (E. coli 1, 3, and 4) were decreased in presence of the uncoupler, therefore suggesting the presence of the multidrug efflux system. After healing, only E. coli 1 showed sensibility model, however no alteration occurred in MIC(s) before and after adding the uncoupler. Those data inform the possible presence of a PMF dependent resistance mechanism that is totally or partly codified in plasmid.

Resistance to antibiotics in Gram-negative bacteria isolated from broiler carcasses

One hundred and ninety-seven isolates of Gram-negative bacteria, comprising 10 genera, were isolated from poultry carcasses at a processing plant in order to investigate resistance to low levels of antibiotics. The samples were taken just after evisceration and before inspection. Most of the isolates were of Samonella and Escherichia. Other genera present were Enterobacter, Serratia, Klebsiella, Kluyvera, Erwinia, Citrobacter, Pseudomonas and Aeromonas. Distinct profiles of antibiotic resistance were detected. Resistance to more than two antibiotics predominated and spanned several classes of antibiotics. Salmonellae and escherichiae were mainly resistant to the aminoglycosides, followed by tetracycline, nitrofuran, sulpha, macrolide, chloramphenicol, quinolones and b-lactams. Most isolates were sensitive to 30mg/ml olaquindox, the growth promoter in use at the time of sampling. However, many were resistant to a level of 10mg/ml and 13mg/ml olaquindox, levels present in the gut due to the dilution in the feed. The results suggest a possible role of low level administration of antibiotics to broilers in selecting multi-resistant bacteria in vivo